DEVELOPMENT AND VALIDATION OF LOOP-MEDIATED ISOTHERMAL AMPLIFICATION (LAMP) FOR DETECTION OF LEPTOSPIR GENETIC MATERIAL

А. І. Коробка; В. Л. Ареф’єв

doi:10.31073/onehealthjournal2024-II-07

Автор(и)

А. І. Коробка Національний науковий центр «Інститут експериментальної і клінічної ветеринарної медицини», Харків, Україна
В. Л. Ареф’єв Державний науково-контрольний інститут біотехнології і штамів мікроорганізмів, Київ, Україна https://orcid.org/0000-0001-8828-2468

DOI:

https://doi.org/10.31073/onehealthjournal2024-II-07

Ключові слова:

ДНК, лептоспіроз, петлева ізотермальна ампліфікація, система праймерів

Анотація

Сконструйовано та випробувано праймерні системи та проведено валідацію методики ізотермальної петлевої ампліфікації для експрес діагностики лептоспірозу. Загалом розраховано та проаналізовано in situ та in vitro п’яти сетів праймерів, що були замовлено для синтезу та обрано для подальших найбільш перспективні. Встановлено показники аналітичної чутливості, межі детекції методики, доведено специфічність методики у випробуваннях її з гомологічними та близькими за таксономічними характеристиками гетерологічними зразками генетичного матеріалу, встановлена повна відтворюваність методики за умов її постановки на різному лабораторному обладнанні та з реагентами різних виробників. Розроблена методика петелевої ампліфікації для діагностики лептоспірозу випробувана на польових зразках та встановлена її діагностична ефективність.

Посилання

Bharti, A. R., Nally, J. E., Ricaldi, J. N., Matthias, M. A., Diaz, M. M., Lovett, M. A., Levett, P. N., Gilman, R. H., Willig, M. R., Gotuzzo, E., Vinetz, J. M., and Peru-United States Leptospirosis Consortium (2003). Leptospirosis: a zoonotic disease of global importance. The Lancet. Infectious diseases; 3(12):757–771. https://doi.org/10.1016/s1473-3099(03)00830-2

Suwancharoen, D., Sittiwicheanwong, B., & Wiratsudakul, A. (2016). Evaluation of loop- mediated isothermal amplification method (LAMP) for pathogenic Leptospira spp. detection with leptospires isolation and real-time PCR. The Journal of veterinary medical science; 78(8):1299– 1302. https://doi.org/10.1292/jvms.15-0702

Ellis W. A. (2010). Control of canine leptospirosis in Europe: time for a change?. The Veterinary record; 167(16):602–605. https://doi.org/10.1136/vr.c4965

Gentilini, F., Zanoni, R. G., Zambon, E., and Turba, M. E. (2017). A comparison of the reliability of two gene targets in loop-mediated isothermal amplification assays for detecting leptospiral DNA in canine urine. Journal of veterinary diagnostic investigation : official publication of the American Association of Veterinary Laboratory Diagnosticians; Inc; 29(1):100–104. https://doi.org/10.1177/1040638716672503

Chen, H. W., Weissenberger, G., Atkins, E., Chao, C. C., Suputtamongkol, Y., and Ching, W. M. (2015). Highly Sensitive Loop-Mediated Isothermal Amplification for the Detection of Leptospira. International journal of bacteriology; 147173. https://doi.org/10.1155/2015/147173

Notomi, T., Okayama, H., Masubuchi, H., Yonekawa, T., Watanabe, K., Amino, N., and Hase, T. (2000). Loop-mediated isothermal amplification of DNA. Nucleic acids research; 28(12):E63. https://doi.org/10.1093/nar/28.12.e63

Turchenko O.M., and Zon H.A. (2018) Leptospiroz sobak u m. Sumy: epizootolohichnyi monitorynh, diahnostyka, likuvannia. Veterynarna biotekhnolohiia; 32(2):545-550. (in ukrainian)

Hsu, Y. H., Chou, S. J., Chang, C. C., Pan, M. J., Yang, W. C., Lin, C. F., and Chan, K. W. (2017). Development and validation of a new loop-mediated isothermal amplification for detection of pathogenic Leptospira species in clinical materials. Journal of microbiological methods; 141:55–59. https://doi.org/10.1016/j.mimet.2017.07.010